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Hoechst33342/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。Hoechst33342染色液A可以透过正常细胞膜，而细胞凋亡后，细胞膜对Hoechst33342染色液A的通透性增加，PI染色液B不能透过细胞膜，对正常细胞和凋亡细胞不能染色，而对坏死细胞可以染色。用两种染色液对细胞进行双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜即可对细胞状态进行检测。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色(A+/B+)，凋亡细胞为高蓝色/低红色(A++/B+)，坏死细胞为低蓝色/高红色(A+/B++)。

储存条件：A液和B液-20℃避光保存。C液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ●离心机 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

使用方法：
1．染色缓冲液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL试剂C 加900μL 无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2．收集样本细胞，细胞数量在10×105个以内。
3．用 PBS 洗涤细胞两次。
4．用 500μL-1ml染色缓冲液将细胞重悬。
5．加入5-10μl Hoechst33342染色液A。
6．加入5-10μl PI染色液B。
7．轻轻混匀后 4℃避光孵育10-20分钟。
8．用 PBS 洗涤细胞。
9．用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。HO33342用紫外光激发，PI用蓝光激发。
Hoechst33342-DNA 复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，PI-DNA 复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。

结果分析：
正常细胞为低蓝色/低红色(A+/B+)，凋亡细胞为高蓝色/低红色(A++/B+)，坏死细胞为低蓝色/高红色(A+/B++)。
形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。
相关搜索：Hoechst33342/PI双染试剂盒